一般に、水溶性高分子には粘度の高いものが多くサイズ排除モード(SEC)分析では、濃度依存性がでやすいサンプルです。 ここでは、濃度が0.05%と0.10%のヒアルロン酸をSEC-MALS分析し分離挙動を比較してみました。 上の図はMALSで測定した分子サイズ(RMS半径)と溶出容量をプロットしたものでクロマトグラフはRI検出器の信号です。 溶出容量のずれは、0.10%での高分子成分の溶出遅れに起因していると考えられます。 下の図は測定された分子量とRMS半径の関係をプロットしたものですが、ここでは濃度による差異はありません。 0.10%での高分子成分の溶出の遅れは平均分子量、分子サイズの測定値にはほとんど影響しませんので、SEC-MALSを用いると分離挙動の推察が可能となります。
Sample | : | Hyaluronic acid 0.10%(blue), 0.05%(red), 50μL each |
Column | : | Shodex OHpak SB-806 HQ x 2 |
Eluent | : | 100mM NaNO3 |
Flowrate | : | 1.0ml/min |
Detector | : | DAWN DSP + Shodex RI |
Result | : | 0.10%: Mw = 1015K, RMS radius = 147.3 nm 0.05%: Mw = 1115K, RMS redius = 149.8 nm |